肉汤稀释法测定最低抑菌浓度（MIC)

参考答案：【操作目的】1．检测病原菌对各种抗菌药物的敏感性，指导临床合理用药。2．用于流行病学调查及医院内感染的监控和预防耐药菌株的流行。3．为经验用药提供参考依据。【操作准备】1．标准菌株：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853。2．试剂：0．5号麦氏标准比浊管、抗菌药物、M-H肉汤。3．其他：无菌小试管、试管架、1mL加样器。【操作步骤】1．取无菌小试管26支排成两排。第1排为待测管排，第2排为标准管排。2．另取3支试管，分别作为肉汤对照管、待检菌生长对照管和质控菌生长对照管。3．每排每管加入M-H肉汤2mL，在每排第1管加入经M-H肉汤稀释的抗菌药物原液(256μg／mL)2mL混匀，然后吸取2mL至第2管，混匀后再吸取2mL，至第3管。4．如此连续对倍稀释至第13管，并从第13管中吸取2mL弃去。此时各管抗菌药物浓度依次为128μg／mL、64μg／mL、32μg／mL、16μg／mL、8μg／mL、4μg／mL、2μg／mL、1μg／mL、0．5μg／mL、0．25μg／mL、0．125μg／mL、0．0625μg／mL、0．03125μg／mL。5．第1排试管加入待检菌菌液(1×10CFU／mL)0．1mL，第2排试管加入标准菌菌液(1×10CFU／mL)0．1mL，最终接种量约为5×10CFU／mL。6．置35℃培养箱中孵育18～24小时，观察有无细菌生长。7．结果判断在肉汤对照管无菌生长、待检菌对照管及质控菌对照管生长良好前提下，待测管药物最低浓度管无细菌生长者，即为待检菌的最低抑菌浓度(MIC)。【注意事项】1．抗菌药物溶解稀释后应立即使用，否则应储存于-4℃条件下，并于24小时内使用，以免药物效价降低，影响试验结果。2．采用标准菌株如金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922或铜绿假单胞菌ATCC27853等与测试菌在同一条件下做药敏试验，标准菌株的MIC应落在预期范围内，如果超出该范围应视为失控，不发报告，并须及时查找原因，予以纠正。3．吸取肉汤或药物时其量应准确，否则对药物浓度有影响，最终影响试验结果。【提问】1．何谓MIC?肉汤稀释法测定：MIC的主要意义是什么?用稀释法所测得的某抗菌药物能抑制检测菌肉眼可见生长最低浓度称为最低(或最小)抑菌浓度(minimal inhibitory concentration)，即MIC。肉汤稀释法测定MIC，主要是为了检测病原菌对各种抗菌药物的敏感性，指导临床合理用药。此外，还可用于流行病学调查及医院内感染的监控和预防耐药菌株的流行，同时可为经验用药提供参考依据。2．如何做好肉汤稀释法测定MIC的质量控制?每批或每次试验时应根据测试菌种类分别选用金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922或铜绿假单胞菌ATCC27853等标准菌株在同一试验条件下进行测定。如标准菌株的测试结果超过或低于预期值范围一个稀释度以上时，不应发出报告，同时应检查导致差错的可能原因，以及标准菌株是否被污染或已变异等，并重做测定。3．配置抗菌药物原液的溶剂和稀释剂有哪些?有蒸馏水、pH值6．0的0．1mol／L磷酸盐缓冲液等。4．试验过程中。除了需要用标准菌菌液进行质量控制以外，还需要做些什么对照试验?在实验过程中，除了对待测菌株和标准菌株在同一试验条件下进行测定外，还需要另取3支无菌试管，分别作肉汤对照、待检菌生长对照和质控菌生长对照。