基因工程的主要操作步骤有哪些？
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(一)目的基因的制备 化学合成、基因组DNA文库、cDNA文库、聚合酶链反应PCR (二)载体的选择和构建 (三)目的基因和载体的连接 1 、粘末端连接法 平接法 2 、平末端连接法(T4。效率低) 人工接头法 同聚体加尾 (四)重组子导入宿主细胞 1 、宿主细胞的选择: 原核细胞:大肠杆菌 真核细胞:哺乳类动物细胞、酵母、昆虫 2 、导入方式 转化、转染、转导(感染) (五)重组子 DNA 的筛选和鉴定 1 、根据遗传学性状筛选、根据分子生物学特征筛选 2 、初步鉴定:电泳、酶切 3 、比较明确的鉴定: PCR 、分子杂交 4 、最终测定:序列测定 (六)扩增表达和纯化