简述PCR的基本原理及其应用。

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  • PCR的基本反应步骤包括:①变性。将反应系统加热至95℃,使模板DNA完全变性成单链,同时引物自身和引物之间存在的局部双链也得以消除:②退火。将温度下降至适宜温度(一般较Tm值低5℃),使引物与DNA模板退火结合;③延伸。将温度升至72℃,DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述三个步骤称为一个循环,新合成的DNA分子继续作为下一轮合成的模板,经多次循环(25~30次)后即可达到扩增DNA片段的目的。 PCR反应体系的基本成分包括:模板DNA、特异性引物、耐热性DNA聚合酶、dNTP、含Mg 2+ 的缓冲液。